SVEA C4液相色譜柱是一款適合于蛋白質(zhì)分離分析用的產(chǎn)品。它使用3微米粒徑的硅膠填料,優(yōu)化了孔徑,固定相配體的烷基鏈長及表面鍵合密度,可實現(xiàn)高分辨率和高回收率的分析。使用短柱可以在高流速下實現(xiàn)快速分析。
SVEA C4液相色譜柱在使用前,*行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。
在做柱性能測試時要按照出廠報告中的條件進行,只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。但要注意柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
1、樣品的前處理:
?、傧仁褂昧鲃酉嗳芙鈽悠?;
?、谑褂妙A處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì);
?、凼褂?.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動相的配制:
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
?、倭鲃酉鄬悠肪哂幸欢ǖ娜芙饽芰ΓWC樣品組分不會沉淀在柱中;
?、诹鲃酉嗯c樣品不產(chǎn)生化學反應(yīng);
?、哿鲃酉嗟酿ざ纫M量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長泵的使用壽命;
?、芰鲃酉嗟奈锘再|(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制;
?、萘鲃酉喾悬c不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導致實驗無法進行;
?、拊诹鲃酉嗯渲坪煤螅欢ㄒM行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動相流速的選擇:
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的SVEA C4液相色譜柱,要追求較佳柱效,使用較佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的SVEA C4液相色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
當選用較佳流速時,分析時間可能延長??刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間。